手持式叶绿素测定仪是农业、生态监测和植物生理研究中的重要工具，其测量结果的准确性直接影响实验数据的可靠性。校准是仪器使用前的必要环节，能够减少因环境变化、设备老化等因素引起的误差。本文将详细介绍校准操作的标准化流程及注意事项。

一、校准前准备工作

环境条件检查

确保实验室温度稳定在20-25℃，避免强光直射和电磁干扰。相对湿度应低于60%，防止光学元件受潮。

仪器与耗材准备

原厂校准套件（含标准比色皿）

超纯水（电阻率≥18.2MΩ·cm）

无水乙醇和镜头纸

专用校准溶液（SPAD模拟叶片或标准叶绿素溶液）

恒温水浴锅（控温精度±0.5℃）

仪器预处理

开机预热15分钟使光源稳定，用棉签蘸取乙醇清洁测量窗口，待完全挥发后进行下一步操作。

二、标准化校准流程

第一步：零点校准

将空白比色皿注入超纯水至标线

放入测量槽并关闭遮光罩

长按CAL键进入校准模式，选择"Zero Calibration"

待屏幕显示"0.00±0.02"范围后保存数据

第二步：标准样品校准

将标准校准片置于测量平台

调整探头压力至接触指示灯亮起

连续测量3次取平均值，偏差应＜1.5%

输入标准片标定值（如34.5 SPAD）

系统自动生成校正系数并存储

第三步：动态范围验证

配制梯度浓度叶绿素溶液（建议0/10/30/50μg/mL）

依次测量并记录仪器读数

绘制标准曲线，线性相关系数R2应＞0.995

对偏离点进行二次校准修正

三、校准后验证与维护

完成校准后需进行现场验证：选取已知叶绿素含量的新鲜叶片，使用多点测量法（叶尖、叶中、叶基各3点）验证数据一致性，相对标准偏差（RSD）应控制在3%以内。建议每两周执行一次短期校准，每月使用NIST标准物质进行溯源校准。

四、常见故障处理

校准值漂移：检查电池电压（应＞4.8V），更换老化LED光源

重复性差：清洁光纤接头，检查遮光罩密封条

数值异常：重新活化标准溶液，避免溶液结晶影响

五、数据记录规范

建立校准日志记录以下信息：

校准日期/操作者

环境温湿度

标准物质批号

校正前后对比数据

仪器序列号及修正系数

通过严格执行上述校准流程，可使测量误差控制在±1 SPAD单位以内。建议配合国家计量院发布的JJG 1191-2023《植物叶绿素测定仪检定规程》建立完整的质量控制体系，确保科研数据的溯源性。定期校准不仅能延长设备使用寿命，更是获得可靠实验数据的重要保障。